技術(shù)原理簡介

條件性過表達(dá)小(大)鼠的構(gòu)建主要是通過Cre/LoxP重組系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)的。該系統(tǒng)是位點(diǎn)特異性重組酶系統(tǒng)，已發(fā)展成為在體內(nèi)、外進(jìn)行遺傳操作的有力工具。其可以使靶基因的表達(dá)或缺失發(fā)生在試驗(yàn)動(dòng)物發(fā)育的某一階段或某一特定的組織器官。此外，若與控制Cre表達(dá)的其他誘導(dǎo)系統(tǒng)相結(jié)合，還可以對(duì)某一基因同時(shí)實(shí)現(xiàn)時(shí)空兩方面的調(diào)控。通過構(gòu)建帶有廣泛表達(dá)啟動(dòng)子-LoxP-Stop-LoxP-目的基因的條件性調(diào)控表達(dá)框架，通過顯微注射制備在特定位點(diǎn)，如Rosa26, H11等位點(diǎn)，帶有條件性調(diào)控表達(dá)框架的敲入小(大)鼠模型，轉(zhuǎn)基因在正常情況下并不表達(dá)，只有與相應(yīng)的組織特異性表達(dá)的Cre/CreERT2小鼠雜交后，因Stop終止序列在特定的組織中被去除，從而達(dá)到轉(zhuǎn)基因在誘導(dǎo)性/特定組織中特異性表達(dá)的目的。

Rosa26或H11位點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)

表達(dá)Pattern穩(wěn)定: 定點(diǎn)敲入構(gòu)建過表達(dá)，不像隨機(jī)插入基因組的轉(zhuǎn)基因，表達(dá)特異性和表達(dá)量（expression pattern）穩(wěn)定
表達(dá)Pattern不受上下游DNA元件影響： Rosa26 or Hipp11(H11)無影響基因特異表達(dá)的調(diào)控元件，不會(huì)影響敲入的啟動(dòng)子的表達(dá)Pattern

TALEN/CRISPR構(gòu)建條件性敲除小(大)鼠技術(shù)流程圖

服務(wù)流程及周期

服務(wù)流程及周期圖