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點突變小(大)鼠

 在目的基因上引入點突變,對于疾病模型的建立具有重大的意義,如候選點突變是基因疾病相關(guān)的人類基因SNP,對目標(biāo)基因的候選位點進行點突變,若動物模型上再現(xiàn)了該疾病的性狀,則建立的小鼠模型可以為精準(zhǔn)治療提供模擬人類疾病的動物模型。

技術(shù)原理簡介

基因點突變(Point Mutation)是指通過TALEN/CRISPR技術(shù)在靶基因的目的位置引進特定的突變。通過針對靶基因的待突變位點設(shè)計相應(yīng)的打靶質(zhì)粒,并且根據(jù)需要點突變的位置構(gòu)建含點突變的Donor質(zhì)粒,將Donor質(zhì)粒與打靶質(zhì)粒共同顯微注射進小鼠的受精卵中,TALEN/CRISPR定位到基因組上的靶序列并切割雙鏈DNA,在隨后的修復(fù)過程中,細(xì)胞以含同源序列的Donor質(zhì)粒為模版修復(fù)基因組DNA,最終獲得在目的DNA序列引進點突變的小鼠。
 

 TALEN/CRISPR構(gòu)建定點敲入小(大)鼠技術(shù)流程圖

 

服務(wù)流程及周期

 


服務(wù)流程及周期圖

步驟 內(nèi)容    周期
敲入元件獲得  客戶提供或全基因合成 根據(jù)實際情況而定
Cas9/gRNA的合成和同源模板(Donor)構(gòu)建 合成Cas9/gRNA,檢測Cas9/gRNA活性,構(gòu)建同源模板質(zhì)粒  2個月
得到Founder Cas9/gRNA體外轉(zhuǎn)錄成mRNA和Donor質(zhì)粒共同顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周后出生,2周齡基因型鑒定。 2-3個月
得到F1代雜合子  2個月后性成熟,F(xiàn)ounder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周齡基因型鑒定,獲得穩(wěn)定傳代的基因突變雜合子F1代。  3-4個月

 

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